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細菌冷凍干燥機操作

點擊次數:1945    更新時間:2017-04-28

    細菌冷凍干燥機顧名思義是一種用于細菌、菌種、微生物等凍干保存的真空冷凍干燥機,也常常被稱為細菌凍干機、菌種冷凍干燥機、微生物冷凍干燥機。其操作步驟如下:

一、菌株準備及分裝

    液體培養的菌種,經離心收集和用生理鹽水洗滌細胞,收集的菌體用保護劑(10ml脫脂牛奶中加1g米孢子粒)懸浮制成菌懸浮液。懸液中菌數要求達到108-1010個/ml為宜。懸液制備完成盡快分裝和凍結。分裝安瓿時可用滅菌長嘴毛吸管或長針注射器,每管分裝量約0.1-0.2ml(0.3-0.5ml,單管式冷凍管球形裝液區內的裝液量應為球體積的一半左右),分裝安瓿管時間盡量要短,在1-2小時內分裝完畢并且預凍,分裝時應注意在無菌條件下操作。

二、預凍

    置于-80℃超低溫冰箱預凍1-2小時(也可直接選購-80℃低溫實驗室冷凍干燥機)。

三、 冷凍干燥

1. 將冷凍后的樣品安瓿管置于細菌冷凍干燥機上(先開機預冷30分鐘以上才開泵),開始冷凍干燥,時間一般為數小時。終止干燥時間應該根據以下情況判斷:安瓿管內凍干物呈酥塊狀或者松散狀;真空度接近空載時的zui高值;選用1-2支對照管,其水份與菌懸液同量,視為干燥完結。(注意:確認干燥后,要先開啟冷凍室的進氣閥,讓真空釋放,然后停泵,打開冷凍室,將冷凍干燥管取出。)

2. 真空封口

將安瓿管頸部棉塞以下處用強火焰拉細進行熔封。

四、 保藏

   安瓿管保藏在-20℃超低溫冰箱中。

五、 活化

    如果要從中取出菌種恢復培養,可先用75%酒精將管得外壁消毒,用無菌棉簽沾冷水,在頂部擦一圈,頂部出現裂紋,用挫刀或鑷子頸部輕叩一下,敲下已開裂的安瓿管的頂端,,在安瓿管中加入0.5-1ml液體培養基,慢慢旋轉安瓿管,使凍干菌種復蘇,然后直接接種到瓊脂斜面或涂布平板。

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